蛋白纯化仪   预约
	管理人员	汤玉	仪器型号	GE AKTApurifier10
	联系电话	021-54341003	放置位置	闵行校区生科院132-冷室
	使用方向	对外开放	仪器状态	正常

仪器收费标准（院内、院外、校外）： 

院内：40元/小时　
院外：100元/小时　
校外：200元/小时

技术参数：

◆ 流速：0.001 - 10 mL/min，压力 0 - 25 MPa（3650 psi）

◆ UV 检测：190 - 700 nm 同时 3 波长，pH 检测 2 - 12

◆ 电导检测：1 μS/cm - 999.9 mS/cm

◆ 阀门：8 通道缓冲液切换阀，8 通道大组分切换阀

◆ 用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质

◆ 适用各种层析技术，专门分离和纯化各类生物分子，包括天然蛋白质，重组和融合蛋白质、肽、寡核酸、质粒、病毒、抗生素、生物碱等等，操作肽图等精确分析和小量制备应用

仪器主要功能及应用：

主要功能
◆ 用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质
应用
适用各种层析技术，专门分离和纯化各类生物分子，包括天然蛋白质，重组和融合蛋白质、肽、寡核酸、质粒、病毒、抗生素、生物碱等等，操作肽图等精确分析和小量制备应用

仪器使用步骤及注意事项:

1. 开机和准备

a. 打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。

b. 准备工作溶液和样品。所有的工作溶液和样品必须经过0.45 µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇）时，

需在使用前用低频超声脱气10 min。

c. 清洗及管道准备。首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内

的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1、B1管道为ON， execute。泵清洗将自动结束。

d. 安装层析柱。在manual里选择pump→flow rate，流速1 mL/mL，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料

说明书中查到），insert，execute。待Injection Valve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。

2. 开始纯化

a. 柱子平衡好后，将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。

b. 上样

b1. 用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。在manual里选择

flowpath→injectionValve→inject，execute。

b2. 用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。

c. 洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择target B（100％）和length（10 CV）。

d. 设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择Frac→ fractionation _stop_900，exectue。

e. 清洗泵及卸下层析柱。将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作将乙

醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。

整个过程防止气泡进入。

3. 实验结束

从软件控制系统的unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。

4. 注意事项

a. 所有缓冲液和样品必须抽滤并且超声才可以上机。

b. 实验过程中时刻关注漏液情况，如漏液请检查各个端口是否拧紧。

c. 样品层析柱请正确使用。

d. 实验完毕请彻底清洗柱子和系统。